CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠

T细胞活化和扩增需要同时提供CD3/TCR信号和CD28共刺激信号。东岭生物经过长期优化，推出CD3/ CD28人T细胞活化/扩增磁珠产品，该磁珠通过在4.5µm粒径磁珠表面偶联抗CD3和抗CD28单克隆抗体，可在体外模拟体内抗原提呈细胞对T细胞进行高效的活化与扩增。

其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分

培养基

胎牛血清

磷酸盐缓冲液PBS

EDTA

使用说明

(请详细阅读使用说明后再开始相关实验)

A. CD3/CD28 单抗偶联磁珠的准备

使用前，需要洗去磁珠的保存液。

1.在使用前，将磁珠悬浮液震荡重悬30秒，以获得均一的悬浮液；

2.根据需要，转移适量磁珠悬浮液至Eppendorf管中；

3.加入等体积的清洗液，或至少1ml磁珠清洗液，通过震荡5秒或反复吹打10次均匀混合；

4.将管子置于磁力架3分钟，在分离过程中，不要将管子从磁力架上取下；

注：请勿使用低于推荐的时间，以免磁珠脱落损失。

5.用移液器将管中上清液移除（此时管置于磁力架上）；

6.重复洗一次（步骤3-4），然后将磁珠重悬于缓冲液或培养基备用；

B. 人T细胞的活化

1.按照标准程序获得纯化的2×10⁶个T细胞；

2.加入20µL本品磁珠，以获得1：1的磁珠与细胞比例（不同细胞量参考培养体积建议表）；

3.根据特定实验要求，在37℃的CO₂细胞培养箱中培养；

4.收集活化的T细胞，直接用于进一步分析。

5.对于流式细胞仪应用，在染色前应去除磁珠。将细胞悬液收集至Eppendorf管中，置于磁力架1-2分钟，将含有细胞的上清液转移至新Eppendorf 管中，弃磁珠。

C. 人T细胞的扩增

1.以1×10⁶个纯化的T细胞/ mL的浓度将细胞接种于合适的组织培养板或组织培养瓶中；

2.按照每1×10⁶个纯化的T细胞加入10 µL本品磁珠，确保磁珠与细胞的比例为1：1；

3.培养基中加入30 U/mL 重组人IL-2；

4.根据特定实验要求，在37℃的CO₂细胞培养箱中培养；

5.每日检查细胞培养物，观察细胞大小和形状；

6.彻底重悬后，每两天计数细胞；

7.当细胞密度超过2.5×10⁶个细胞/ml或当培养基变成黄色时，将细胞适当扩孔。

注意事项

1.在使用前，必须将磁珠充分混匀重悬；

2.切勿使用低于推荐剂量的磁珠；

3.使用过程中避免产生气泡；

4.在流式细胞仪分析之前，应去除磁珠以及与磁珠结合的细胞。T细胞激活后的2-3天，一些细胞会牢固地与磁珠结合，可通过移液彻底重悬磁珠/细胞悬液，在磁力架上分离磁珠和细胞，收集含有T细胞的上清液。

5.当使用细胞进行蛋白质组学或基因表达等分子水平研究时，在去除磁珠之前需先裂解细胞。

附录

表1. 磁珠：细胞=1:1时培养基及磁珠体积推荐表

数据展示

图1：使用东岭CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化人CD3+T细胞，磁珠与细胞比例1:1，活化24小时后显微镜拍照记录T细胞克隆形成明显。

图2：使用东岭CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化人CD3+T细胞，磁珠与细胞比例1:1，活化24小时后流式染色CD25/CD69鉴定T细胞活化优秀。

图3：使用东岭CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化人CD3+T细胞，磁珠与细胞比例1:1，活化24小时后感染GFP慢病毒，MOI=1.0（即病毒颗粒与T细胞数目比例为1:1），感染效率达约60%之多。

图4：使用东岭CD3/CD28人T细胞活化/扩增磁珠活化培养人CD3+T细胞，磁珠与细胞比例1:1，10天内扩增达100倍以上。