人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒

人CD34+造血干/前体细胞扩增试剂盒是为在体外培养和扩增人CD34+造血干/前体细胞而专门设计的一款含血清培养基套装。该试剂盒可在7天内诱导人CD34+造血干/前体细胞扩增达~10倍，是研究人CD34+造血干/前体细胞扩增和功能、以及产生人CD34+造血干/前体细胞的重要培养系统。

产品成分

其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分

人CD34+细胞磁珠分选试剂

MS5基质细胞

丝裂霉素

完全培养基配制

(在无菌生物安全柜中，开展以下操作)

1.在4℃冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。

注：解冻后的补充因子和血清可放置于4℃冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20℃冰箱，不可反复冻融！

2.扩增培养基配制：将1体积的扩增补充因子和10体积的血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人CD34+造血干/前体细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。

注：配好的完全培养基请于4℃保存，且于1个月内使用完毕。

使用说明

(请详细阅读使用说明后再开始相关实验)

1.D0：收集培养的MS5细胞，使用含10ng/ml丝裂霉素的培养基重悬细胞，调整细胞密度至＜1*10^7/ml，置于细胞培养箱中，37℃，5% CO₂，孵育3小时。

2.使用20ml含有2.5%血清的PBS缓冲液彻底清洗MS5细胞，去除丝裂霉素。

3.重复步骤2.

4.使用MS5培养基重悬细胞，调整细胞密度为2.5*10^5/ml，按照如下表格铺于培养板，过夜培养使细胞贴壁：

5.D1：使用磁珠分选人CD34+造血干/前体细胞（参考所使用试剂盒的说明书)，计数。

注：G-CSF富集的健康供体每100ml外周血中约含有5*10^5CD34+造血干/前体细胞。

6.使用扩增培养基重悬CD34+造血干/前体细胞，调整细胞密度至5*10^4/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板（铺板之前去除MS5培养基）：

7.将培养板置于细胞培养箱，37℃，5%CO₂，静置培养。

8.D3：半量换液。小心贴培养板侧壁用枪尖吸走1/2体积旧培养基，补充加入新鲜扩增培养基至初始培养体积（步骤6表格）。

注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激；

9.D6：半量换液，同步骤8.

10.D7：轻轻吹打细胞，收集悬浮细胞，即为扩增的人CD34+造血干/前体细胞，可进行后续操作和分析。

注：此步骤需轻柔吹打细胞，以免MS5基质细胞脱落。一般来说，MS5基质细胞贴壁牢固，轻柔吹打不会导致MS5脱落，操作人员可在显微镜下观察确认MS5脱落情况。

数据展示

图：人CD34+造血干/前体细胞扩增鉴定。磁珠分选的人CD34+造血干/前体细胞按照上述说明培养7天后，进行表型鉴定及扩增倍数鉴定。