其他本试剂盒未提供但需用的重要试剂和组分

人T细胞磁珠分选试剂

完全培养基配制

（在无菌生物安全柜中，开展以下操作）

1.在4℃冰箱解冻补充因子和胎牛血清，混匀后使用。

注：解冻后的补充因子和血清可放置于4℃冰箱，在1个月内使用；或者分装至合适体积后，保存于-20℃冰箱，不可反复冻融！

2.活化培养基配制：将1体积的活化补充因子和4体积的胎牛血清加入到35体积的基础培养基中，充分混匀，得到人T细胞活化培养基。如取100ul补充因子和400ul胎牛血清加入至3.5ml基础培养基，以此类推。

扩增培养基配制：将1体积的成熟补充因子和10体积的胎牛血清加入到89体积的基础培养基中，充分混匀，得到人T细胞扩增培养基。如取100ul补充因子和1ml胎牛血清加入至8.9ml基础培养基，以此类推。

注：配好的完全培养基请于4℃保存，且于1个月内使用完毕。

使用说明

(请详细阅读使用说明后再开始相关实验)

1.使用磁珠分选人外周血单个核细胞中T细胞（参考所使用试剂盒的说明书），计数。

注：健康供体每1ml外周血中约含有5-10*10^5 T细胞。

2.D0：使用活化培养基重悬T细胞，调整细胞密度至1*10^6/ml，按照如下表格所示将细胞铺于培养板：

3.将培养板置于细胞培养箱，37℃，5%CO₂，静置培养。

4.D2：补充1/4初始培养体积的新鲜活化培养基（参考步骤2表格）。

注：完全培养基请恢复至室温后使用，减少对细胞的刺激。

5.D3：扩孔。

1)收集细胞，离心去除活化培养基，使用扩增培养基重悬，计数；

2)调整细胞密度至5*10^5/ml，按照如下表格将细胞铺于培养板，继续扩增培养T细胞：

6.D5/D7：细胞计数，按照步骤5所示进行细胞扩增，或收集细胞进行后续操作和分析。

数据展示

图：人T细胞活化扩增培养鉴定。分选的人CD4+T细胞按照试剂盒说明活化后第三天，显微镜下观察克隆形成（A）；分选的人CD4+T和CD8+T细胞按照试剂盒说明培养至图示天数，收集细胞计数计算扩增倍数（B）